REPLIEMENT

L'un des paradigmes fondateurs de la biologie moléculaire a été récemment ébranlé par la découverte de protéines non structurées à l'état natif. Ces protéines dont les gènes pourraient constituer 30 % du génome chez les eucaryotes sont généralement impliquées dans les processus régulateurs et l'assemblage de complexes supramoléculaires tels que le ribosome. Ainsi, les structures cristallographiques des sous-unités ribosomiques, montrent-elles que de nombreuses protéines ribosomiques contiennent de grandes extensions qui se faufilent entre les hélices d'ARN et plongent profondément à l'intérieur du ribosome. Tout laisse à penser que ces extensions, très riches en acides aminés basiques, sont dépourvues de structures secondaire et tertiaire en l'absence d'ARN ribosomique. Le rôle de ce désordre protéique dans l'organisation du ribosome reste cependant à éclaircir. L'expérience que nous avons récemment acquise par l'étude de la protéine ribosomique L20 d' Escherichia coli, qui se distingue par la très grande taille de son extension N-terminale, nous incite à étendre notre étude à d'autres protéines ribosomiques contenant des extensions. Dans un premier temps, nous identifierons les protéines dont l'extension est essentielle à la viabilité bactérienne et qui sont impliquées dans l'assemblage du ribosome. Nous caractériserons leur degré de désordre en utilisant un ensemble de techniques complémentaires telles que le dichroisme circulaire, la RMN et la cristallographie. Sur la base des résultats obtenus nous concevront des protéines mutantes dont les propriétés seront analysées à leur tour in vivo et in vitro. Nous espérons ainsi obtenir des informations détaillées qui nous permettront de mieux caractériser les propriétés intrinsèques de ces extensions non structurées, de comprendre comment elles se structurent dans le ribosome, de définir leur rôle dans le repliement de l'ARN ribosomique et donc dans l'assemblage du ribosome. Ce projet réunit quatre groupes dont l'expertise s'étend de la génétique moléculaire à la biologie structurale en passant par la spectroscopie.